导读:操作步骤/方法1过滤除菌操作时,滤器和过滤瓶等装置使用前用高压蒸锅进行消毒灭菌2都需要高压灭菌,不过如果你使用的滤器是进口灭过菌的就不需要了,前提是你没拆开过。3KRBB液的配方是:NaCl118.5mmol/L,CaCl22.54mmol/L,KH2PO41.9mmol/L,KCl4.74mmol/L,NaHCO325mmol/L,MgSO41.9mmol/L,HEPES10mmol/L,BSA...
操作步骤/方法
1
过滤除菌操作时,滤器和过滤瓶等装置使用前用高压蒸锅进行消毒灭菌
2
都需要高压灭菌,不过如果你使用的滤器是进口灭过菌的就不需要了,前提是你没拆开过。
3
KRBB液的配方是:NaCl118.5mmol/L,CaCl22.54mmol/L,KH2PO41.9mmol/L,KCl4.74mmol/L,NaHCO325mmol/L,MgSO41.9mmol/L,HEPES10mmol/L,BSA1%)。而10mmol/LHEPES缓冲液配制方法如下:准确称取HEPES2.383g,加入新鲜三蒸水定容至。
4
你只要有滤膜和配套的过滤器就可以了,一般在超净工作台上进行。滤膜用0.22微米或0.45微米两种规格,指的是滤膜的孔径大小吧。一般0.22就够了!
5
如果溶液的量比较大,超过500ml,可以采用已灭菌的抽滤瓶,预先垫好0.22um的滤膜。抽滤瓶灭菌前要检查封口用纱布或棉花堵牢,使用时,不用在无菌室中进行,只要保证收集瓶无菌状态就可以。抽滤后,过滤好的溶液在无菌条件下倒进已灭菌的空试剂瓶中。
6
如果用小量的溶液过滤,无菌室内用一次性注射器和一次性0.22um滤膜(millipore或pall都有卖)就可以。
7
过滤的量,如果量小,用注射器加滤器0.22微米滤膜过滤,滤器加上滤膜后盖紧,稍旋松,饭盒密封100度蒸馏水煮沸30分钟灭菌,用来承接无菌糖水的瓶需高压。用时在无菌操作台上操作,并先旋紧滤器,注意滤器外流下去的哪怕一滴也会造成染菌;过滤应该是费力的,如果感觉很轻松,则滤膜已破。0.45微米的滤膜一般用于两次过滤的第一次,以防止0.22堵塞。注射器,若能高压更好些。
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如果量大,正压可用蠕动泵接皮管接不锈钢滤器大张滤膜,这些都是要高压的。负压可用抽滤。
END
以上就是小编为大家介绍的过滤除菌操作如何进行的全部内容,如果大家还对相关的内容感兴趣,请持续关注上海建站网!
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