导读：操作步骤/方法【方法1】11.一.制作标准曲线（测定细胞具体数量）21、首先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞到培养板内。32、按照比例（例如：1/2比例）依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做3-5个细胞浓度梯度，每个浓度建议3-6个复孔。43、接种后培养2-4小时使细胞贴壁，然后加CCK试剂培养一定时间后测定OD值，制作出一条以细胞数量为横坐标（X轴），OD值...
操作步骤/方法
【方法1】
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1.一.制作标准曲线（测定细胞具体数量）
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1、首先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞到培养板内。
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2、按照比例（例如：1/2比例）依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做3-5个细胞浓度梯度，每个浓度建议3-6个复孔。
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3、接种后培养2-4小时使细胞贴壁，然后加CCK试剂培养一定时间后测定OD值，制作出一条以细胞数量为横坐标（X轴），OD值为纵坐标（Y轴）的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞的数量（使用此标准曲线的前提是实验的条件必须要一致，便于确定细胞的接种数量以及加入CCK后的培养时间。）
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2.二.细胞活性检测
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1、在96孔板中接种细胞的悬液（100μL/孔）。将培养板放在培养箱中预培养一段时间（37℃,5%CO2）。
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2、向每孔加入10μLCCK溶液（注意不要在孔中生成气泡）
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3、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。
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4、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。
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5、若暂时不测定OD值，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定，吸光度并不会发生改变。
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4.三.细胞增殖-毒性检测
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1、在96孔板中配置100μL的细胞悬液。将培养板放在培养箱预培养24小时（37℃，5%CO2）。
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2、向培养板加入10μL不同浓度的待测物质。
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3、将培养板在培养箱孵育一段适当的时间（例如：6、12、24或48小时）。
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4、向每孔加入10μLCCK溶液（注意不要再孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数）。
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5、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。
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6、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。
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7、若暂时不测定OD值，就可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定，吸光度不会发生变化。
END
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